蛋白質的鑑定方法

蛋白質鑑定是指用一定生化和物理方法對蛋白質進行準確的篩選和鑑定。傳統的蛋白質鑑定方法，如免疫印跡、已知或未知蛋白質的遷移分析以及多肽的化學測序，這些鑑定方法相對複雜、費時且準確性較低。

蛋白質鑑定方法經歷了影象分析技術、微測序、氨基酸組成分析到質譜分析的過程。影象分析技術利用到光譜儀，整個過程涉及膠點檢測、背景去除，膠點匹配和資料庫構建。影象分析和氨基酸組成分析需要與其他蛋白質鑑定技術相結合以完成整個過程。微測序技術發展日新月異，已經達到了蛋白質自動識別的能力。目前，研究人員越來越傾向於選擇質譜相關技術來快速鑑定蛋白質。

蛋白質質譜鑑定的不同方法

質譜法可以將肽指紋圖譜和肽片段的測序結果與蛋白質資料庫中蛋白質的理論肽質譜圖指紋圖（PMF）進行比較，以尋找最佳的候選蛋白質。與質譜法相關的蛋白質鑑定方法包括基於MALDI-TOF的蛋白質鑑定和

基於質譜的蛋白質鑑定

。

MALDI-TOF/MS

MALDI-TOF/MS的原理

MALDI-TOF是一種基質輔助鐳射解吸/電離飛行時間質譜儀。基於MALDI-TOF的蛋白質指紋圖譜分析方法是用特定的蛋白水解酶（通常是胰蛋白酶）消化樣品，獲得質譜，生成所有多肽（或MH +）的質量。利用這些質量特徵作為指紋，在資料庫中搜索蛋白質並與測量質量相匹配。與最高分相匹配的蛋白質是候選蛋白質。

MALDI-TOF質譜分析的過程

MALDI-TOF/MS的優勢

MALDI-TOF/MS的優勢在於高精度離子反射器和延遲的離子提取，依賴於這項優勢，MALDI-TOF/MS可以快速收集資料並對結果進行分析。

MALDI-TOF/MS的應用

MALDI-TOF/MS主要用於臨床醫學、食品工業和動植物檢疫中微生物的鑑定和分類。

LC-MS/MS

LC-MS/MS的原理

液相色譜-質譜系統可以透過分析物質的分子量和元素組成來研究分子結構等資訊。在使用LC-MS/MS進行測序鑑定蛋白質時，透過高效液相色譜法分離蛋白水解消化（通常為胰蛋白酶消化）中的多肽混合物。用Tandam質譜和HPLC對肽段進行碎裂，對每個片段的肽段進行質譜分析。每個樣品通常有數千個MS/MS譜圖，每個對應於特定的肽序列MS/MS譜圖用於在蛋白質資料庫中搜索匹配的肽以最終鑑定蛋白質。此外，將反相液相色譜和串聯質譜相結合，可以檢測到皮摩爾級別的蛋白質。目前蛋白質鑑定多采用酶解、液相色譜分離、串聯質譜和計算機演算法相結合的方法。

液相色譜-串聯質譜聯用（LC-MS/MS）

LC-MS/MS的優勢

LC-MS/MS可以分析小或中極性分子，具有較高的靈敏度和特異性。

LC-MS/MS的應用

LC-MS/MS可以測定蛋白質分子量，分析多肽和蛋白質修飾位點，鑑定蛋白質。在生物化學、農業和臨床醫學等領域均有應用。

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